杜仲叶提取物对异育银鲫生长、血清非特异性免疫和肌肉品质的影响

一、试验目的
       考察饲料中添加杜仲叶提取物对异育银鲫生长、血清非特异性免疫指标、肌肉品质以及营养物质消化率的影响，为杜仲在水产养殖业中合理应用提供科学依据。
二、试验材料与方法
1. 试验设计与饲料
    由试验一(生长试验)和试验二(消化试验)组成。
试验一：以基础饲料为对照组，在基础饲料中分别添加0.1％、0.15％和0.2％杜仲叶提取物(等量减少麦麸用量)，以绞肉机加工成直径2.5 mm的颗粒饲料(晾干装袋备用)，共4个处理组，每组设3个平行。基础饲料组成见表1。

试验二：同试验一。并在各组饲料中添加0.5％三氧化二铬作指示剂，相应减少0.5％次粉用量。
2. 试验用鱼
试验一：异育银鲫平均体重(24.04-2.0)g，试验分为4个处理组，每处理组3个重复，每重复17尾鱼，共204尾鱼。
试验二：异育银鲫平均体重(55.3±3.5)g，试验分为4个处理组，每处理组3个重复，每重复12尾鱼，共144尾鱼。
3. 指标测定与方法
3.1 生长指标
    于试验结束后饥饿24 h，称量鱼体重，体高、体长，内脏重，主要测定指标有：增重率、特定生长率、饲料系数、饲料效率、体长提高比、脏体比、肥满度、成活率。
3.2 免疫指标
    试验一饲养试验结束后，每池随机取鱼4尾于尾静脉处抽血，6000 r/min离心10 min，取上层血清，冷冻，备用。分别测定超氧化物歧化酶、溶菌酶和碱性磷酸酶的活力，所用试剂盒均购自南京建成生物技术研究所。超氧化物歧化酶(SOD)活性测定采用黄嘌呤氧化酶法；溶菌酶活性测定采用比浊法；碱性磷酸酶活性测定采用对硝基苯磷酸盐法。
3.3 肉质指标
①肌肉基本生化成分的测定
    试验一饲养试验结束后，每池取鱼3尾，取背部白肌于 -18℃下低温冷冻保存。肌肉基本生化成分的测定包括水分、粗蛋白、粗脂肪。水分含量测定：105℃烘干失水法；粗蛋白测定：凯氏定氮法；粗脂肪测定：索氏抽提法。
②肌肉失水率的测定
    各池随机取鱼3尾采背部肌肉鲜样5 g左右，记为W1，置于沸水中煮沸5 min，取出后放于滤纸上吸干表面水分，称重为W2，计算公式为：
    失水率=（W1-W2）/W1×100%
③耐折力的测定
    取试验鱼背部肌肉鲜样0.3～0.5 g，剪碎，加入A液(配制：称取KCI 14.90 g，EDTA-2Na 3.44 g，硼酸 4.78 g，用蒸馏水溶至2 L，pH值7.0)，匀浆15 s(12000 r/min)，取样于光学显微镜(10×40倍)下观察并随机测量50根肌原纤维长度，取其平均值代表肌原纤维耐折力。
④肌纤维直径测定
    取试验鱼背部肌肉约2.0 cm X l.0 cm X l.0 cm，于20％硝酸溶液中浸泡24 h，切取约1 立方米小块肌肉于载玻片上，加1滴甘油以解剖针将肌纤维分离，于光学显微镜(10×40倍)下，随机测量50根肌纤维的直径，取其平均值作为该样本的肌纤维直径。
3.4 消化率和肠蛋白酶活力的测定
①消化率的测定
    粗蛋白采用凯氏定氮法测定，三氧化铬采用湿式灰化定量法测定。
②肠蛋白酶的活力测定
    取试验鱼肠第一个弯曲之前部分。采用福林一酚法测定。蛋白酶比活力单位定义为：粗酶液每mg蛋白在pH-7.5时每min内水解酪蛋白产生1肚g酪氨酸，即为蛋白酶比活力1个单位(U)。
3.5 数据统计
    试验数据以平均值±标准误表示，采用SPSS 11.5统计软件进行单因素方差分析和多重比较处理。
三、试验结果
1. 杜仲叶提取物对异育银鲫生长性能的影响
    杜仲叶提取物对异育银鲫生长性能的影响见表2。从表2可见：添加0.15％的杜仲叶提取物分别提高了异育银鲫的增重率12.9％、饲料效率15.8％、蛋白质效率11.6％(P<0.05)，显著降低饲料系数(P<0.05)；而添加0.1％、0.2％的杜仲叶提取物对上述指标无显著影响(p>0.05)。各处理组在形体体长体高比、脏体比、肥满度方面无显著差异(P>0.05)。

2. 杜仲叶提取物对异育银鲫SOD、溶菌酶、碱性磷酸酶活力的影晌
    杜仲叶提取物对异育银鲫SOD、溶菌酶、碱性磷酸酶活力的影响见表3。由表3可见：添加0.1％、0.15％、0.2％杜仲叶提取物均可显著提高碱性磷酸酶的活力(P<0.05)。此外，0.15％杜仲叶提取物可显著提高SOD、溶菌酶的活性(P<0.05)；0.1％、0.2％的杜仲叶提取物可在不同程度上提高SOD和溶菌酶活性。

3. 杜仲叶提取物对异育银鲫肌肉品质的影响
    杜仲叶提取物对异育银鲫肌肉品质的影响见表4。从表4可见：添加0.15％杜仲叶提取物显著提高肌肉中粗蛋白含量(P<0.05)，0.1％杜仲叶提取物组也有提高肌肉粗蛋白含量的趋势(P<0.10)。在肌肉物理性能指标方面，添加0.15％杜仲叶提取物显著提高肌肉耐折力，减小肌肉失水率和肌纤维直径(P<0.05)，其余各组与对照组相比无显著差异(p>0.05)。

4. 杜仲叶提取物对异育银鲫消化率和肠蛋白酶活力的影响
    杜仲对异育银鲫消化率的影响见表5。由表5可见：与对照组相比，添加0.15％杜仲叶提取物显著提高异育银鲫的干物质消化率、粗蛋白消化率和肠蛋白酶活力(P<0.05)，添加0.1％杜仲叶提取物有提高于物质和粗蛋白消化率趋势(P<0.10)。

四、结果分析
    试验一：采用平均体重为(24.0±2.0)g的异育银鲫鱼种，在基础饲料中分别添加0.0％(对照组)、0.1％、0.15％和0.2％杜仲叶提取物，饲养8周后，各组异育银鲫增重率分别为124.9％、127.9％、141.0％、123.2％，其中添加0.15％杜仲叶提取物较对照组显著提高鱼体增重率，降低饲料系数(P<0.05)；对血清非特异性免疫指标的测定表明：添加0.1％、0.15％、0.2％杜仲叶提取物可在不同程度上提高血清超氧化物歧化酶(superoxide dismulascSOD)、溶茵酶(1ysozyme，LSZ)和碱性磷酸酶活性(alkaline phosphatase，AKP)，其中添加0.15％杜仲叶提取物对血清非特异性免疫指标的影响最显著；在肌肉品质方面，添加0.15％杜仲叶提取物可提高肌肉粗蛋白含量和肌肉耐折力(P<0.05)，降低肌纤
维直径和肌肉失水率(P<0.05)。
    试验二：在基础饲料(含0.5％三氧化铬)中分别添加0.0％(对照组)、0.1％、0.15％和0.2％杜仲叶提取物，饲养平均体重为(55.3±3.5)g的异育银鲫，测定饲料营养物质消化率及肠道蛋白酶活性。结果表明：添加0.15％杜仲叶提取物可显著提高异育银鲫粗蛋白消化率、干物质消化率和肠道蛋白酶活性(P<0.05)。
    上述结果表明，饲料中添加0.15％杜仲叶提取物可提高异育银鲫对营养物质的消化率，促进异育银鲫生长，并能提高血清非特异性免疫力，改善肌肉品质。